商品詳情：
海藻糖6磷酸合成酶(TPS)測試盒測定意義：

海藻糖是由兩個葡萄糖分子以α，α-1-1 糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖，廣泛存

在于細(xì)菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、無脊椎動物和高等植物等多種有機(jī)體中。海藻糖的非還原性決定了它對酸、堿、高溫等的穩(wěn)定性。另外，它本身具有很強(qiáng)的吸水性，使它在生物體內(nèi)具有抗脫水作用，在逆境條件下可通過識別外界刺激、產(chǎn)生和傳遞信號、基因表達(dá)和代謝調(diào)節(jié)來保護(hù)植物免受不良環(huán)境的傷害。

植物體內(nèi)主要以葡萄糖為底物合成海藻糖，該反應(yīng)首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase，TPS)的作用下，催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖反應(yīng)生成中間產(chǎn)物6-磷酸海藻糖，再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 (trehalose 6-phosphate phosphatase，TPP)的作用下去磷酸化，生成海藻糖。因此，測定TPS活性對于研究植物逆境具有重要意義。

測定原理：

TPS催化UDPG與G6P生成海藻糖-6-磷酸，同時產(chǎn)生UDP；UDP在酸激酶與乳酸脫氫酶作用下，氧化NADH為NAD+，NADH的下降速率與UDP含量成正比，通過340nm吸光度下降速率反映TPS活性。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液，4℃避光保存。
商品屬性：

測定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到570 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A測定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測定一次。

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