判斷陰性對照是否污染，關鍵看它是否“干凈"——如果它長了菌或出現陽性信號，就說明實驗環(huán)境或操作有問題了。具體可以這樣排查：
一、先看結果
?無菌檢驗?：陰性對照應該無菌生長，一旦有菌落出現，立刻排查污染。
?PCR檢測?：陰性對照不該有DNA譜帶，有帶就說明體系被污染了。
二、排查污染源
?操作污染?：
檢查手套、吸頭是否混用，操作時是否規(guī)范。
用稀酸擦拭臺面，更換污染手套。
?試劑污染?：
試劑分裝保存，避免反復凍融。
用無菌水做空白對照，若長菌說明試劑有問題。
?環(huán)境問題?：
實驗臺、通風系統(tǒng)是否定期消毒。
操作區(qū)和產物分析區(qū)是否嚴格隔離。
三、優(yōu)化操作
?分區(qū)操作?：標本處理、擴增、產物分析區(qū)分開。
?工具專用?：移液器、吸頭等不混用。
?嚴格消毒?：實驗臺、設備表面用含氯消毒液擦拭。
四、驗證結果
?陽性對照?：用已知陽性樣本驗證檢測能力。
?陰性對照?：用無菌水或空白基質做對照。
?同步培養(yǎng)?：和樣品同溫同時間培養(yǎng)，全程無菌落才算合格。
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